慢速冷凍方法又可使細(xì)胞內(nèi)的水分滲出細(xì)胞外，減少胞內(nèi)形成冰結(jié)晶的機(jī)會，塑料冷凍管，從而減少冰晶對細(xì)胞的損傷常用的細(xì)胞冷凍貯存器為液氮貯存器，規(guī)格有35L3和50L3兩種。
細(xì)胞凍存時(shí)常備的材料有: 0.25%胰蛋白酶，新鄉(xiāng)冷凍管，含10%~20%的血l清培養(yǎng)液，DMSO (分析純)或無色新鮮甘油(121℃蒸氣高壓消毒)，2ml安瓿(或*細(xì)胞凍存管)、吸管、離心管、噴燈、紗布袋(或凍存管架)等。
3. 1900年前后，科學(xué)家基本上肯定了生物成份能夠在零下溫度儲存的事實(shí)。
4.二十世紀(jì)50年代，Luyet 等多位學(xué)者發(fā)現(xiàn)了電解質(zhì)濃度對儲存細(xì)胞的損傷作用，他們的基本結(jié)論是。
電解質(zhì)濃度增大是造成儲存細(xì)胞損傷的主要原因。
5.1972年，Mazur等首先根據(jù)中國*組織培養(yǎng)細(xì)胞的低溫保存實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分析，提出關(guān)于冷凍損傷的兩因素假說目，即冰晶損傷和溶液損傷假說這個(gè)假說認(rèn)為隨著溫度的下降，冰箱冷凍管，細(xì)胞內(nèi)外的水分結(jié)冰，所形成的冰晶會造成細(xì)胞膜和細(xì)胞器的破壞并引起細(xì)胞亡。
主要技術(shù)——凍存技術(shù)：1.液氮法：目前，細(xì)胞凍存尤為常用的技術(shù)是液氮冷凍保存法，主要采用加適量保護(hù)劑的緩慢冷凍法凍存細(xì)胞。
細(xì)胞冷凍技術(shù)的關(guān)鍵是盡可能地減少細(xì)胞內(nèi)水分，減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成。
采用甘油或二甲l基亞砜作保護(hù)劑，10ml冷凍管，這兩種物質(zhì)分子量小，溶解度大，易穿透細(xì)胞，可以使冰點(diǎn)下降，提高細(xì)胞膜對水的通透性，且對細(xì)胞無明顯毒性。
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